단백질 실험 핸드북

제1장 단백질 연구전략
단백질 연구전략

제2장 단백질 정제법
1. 단백질 정제를 시작하기 전에
2. 정제의 진행방법
3. 단백질의 추출과 분획
4. 칼럼 크로마토그래피에 의한 정제

제3장 단백질의 분리와 동정
1. 서론
2. SDS 전기영동법 (SDS-PAGE)에 의한 단백질의 분리
3. 목적 단백질의 겔 내 Protease Digestion과 생성 Peptide의 회수
4. MALDI-TOF MS에 의한 Peptide 질량의 측정 및 데이터베이스 검색에 의한 목적 단백질의 동정
5. LC-MS/MS에 의한 Peptide 질량 측정 및 데이터베이스 검색에 의한 목적 단백질의 동정

제4장 항체 제작과 정제
1. 면역동물의 선택과 면역
2. Polyclonal 항체의 제작
3. Monoclonal 항체의 제작
4. Phage Display를 이용한 Monoclonal 항체의 제작
5. Peptide 항체의 제작과 응용
6. 항체의 제작

제5장 인산화 부위의 동정과 이용
1. 인산화 아미노산 분석
2. 인산화 부위의 동정
3. 인산화 peptide 항체의 제작과 응용
4. 항 인산화 Tyrosine·Serine·Threonine 항체를 이용한 Immunoblotting
5. 인산화 부위 변이체 (mimic)의 도입과 응용

제6장 발현 단백질의 제작과 이용
1. 대장균에 의한 단백질의 발현과 정제
2. Baculovirus에 의한 단백질의 발현과 정제
3. 융합 단백질의 발현과 정제 (FLAG-tag, myc-tag)
4. Random insertion/deletion 변이법을 이용한 변이 단백질의 제작

제7장 단백질의 검출
1. Western blot 법
2. 항체에 의한 면역염색
3. In situ hybridization 법
4. Northern blot 법
5. 내재성 단백질의 세포내 국재의 관찰 (형광항체염색)

제8장 동물세포에¼의 단백질의 발현과 응용
1. 플라스미드를 이용한 일과성 발현
2. 안정형질발현주의 제작법
3. 레트로바이러스를 이용한 발현
4. 아데노바이러스를 이용한 발현
5. Microinjection
6. 단백질의 도입 (protein transfection)
7. 형광 단백질의 구축, 발현과 생세포에서의 해석
8. GFP-PLCδ1-PH, GFP-Akt-PH에 의한 이노시톨 인지질의 국재 관찰
9. 직접 표식한 단백질의 도입과 관찰
10. FRET
11. BRET
12. FACS를 이용한 발현세포의 Sorting
13. siRNA 도입에 의한 유전자 발현 저해

제9장 단백질 간 상호작용 분석과 단백질 성질의 해석
1. 면역침강법
2. 융합 단백질을 이용한 결합 단백질의 탐색
3. 효모 Two-Hybrid 법
4. 효모 Three-Hybrid 법
5. In vivo 단백질 간 상호작용 검출법 (β-lactamase를 이용한 Protein Fragment Complementation Assay : PCA)
6. Protein Microarray 해석
7. BIACORE에 의한 단백질 상호작용의 해석
8. 단백질과 lipid와의 상호작용 해석
9. 단백질과 핵산의 상호작용의 해석 (Gel Shift 법)
10. Activity Gel 법 (In-gel protein kinase assay)

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