꾸지뽕나무로부터 퇴행성 뇌기능 개선을 위한 효능 구명

1장. 개요 3
제1절 배경 3
제2절 가이드 목적 및 구성 5

2. 활성물질의 분리, 정제 및 구조동정 9
가. 공시재료 및 방법 9
나. 꾸지뽕나무 열매 추출물에 대한 용매분획 9
다. 꾸지뽕나무 열매 에틸아세테이트(EtOAc)가용부로부터 물질 분리 및 정제(1)10
라. 기기분석에 의한 화합물의 분석DATa 및 구조동정(1) 13
마. 꾸지뽕나무 열매 에틸아세테이트 가용부로부터 물질 분리 및 정제(II) 28
바. 기기분석에 의한 화합물의 분석Data 및 구조 동정(II) 31
사. 꾸지뽕나무 열매 에틸아세테이트(DtoAC)가용부로부터 물질 분리 및 정제(III) 51
아. 기기분석에 의한 화합물의 분석DATa 및 구조종정(III) 55

3. 추출물의 성분함량 분석 및 품질관리 기준 설정 75
가. 공시재료 및 방법
(1) 꾸지뽕나무 열매의 채취 지역별 추출물의 함량 분석 75
(2) 고속액체크로마토그래프(UPLC),를 통한 기준물질들의 다성분 도잇분석법 활립 76
(3) 꾸지뽕나무 열매 추출물의 수율 조사77
(4) 꾸지봉나무 열매 추출물 지표성분 설정을 위한 분석법 개발78
(5) 2014년 전남 함평 9월 채취 꾸지뽕나무 열매 추출물 함량 조사80
(6) 2014년전만 함평 9월 채취 꾸지봉나무 열매 Ilot추출물 함량 조사81
(7) 2014년 전만 함평 9월 채취 꾸지뽕나무 열매 추출물 채취시기별 함량 조사81
(8) 2015년 꾸지뽕 열매 채취 지역별, 시기별 크기 및 무게 조사82
(9) 2015년 꾸지뽕나무 열매 채취 지역별, 시기별 크기 및 무게 조사82
(10) 2015년 지역별, 시기별 꾸지뽕나무 열매 추출물 성분 함량 모니터링82
나. 결과 및 고찰 83
(1) 꾸지뽕나무 채취 지역별 83
(2) UPLC를 통한 지표물질 다성분 동시분석법 확립 86
(3) 꾸지뽕나무 원료 Validation을 위한 시료 채취 및 패턴 비교 86
(4) 꾸지뽕나무 열매 추출물의 수율조사88
(5) 꾸지뽕나무 열매 추출물 지표성분 설정을 위한 분석법 개발89
(6) 2014년 전남 함평 9월 채취 꾸지뽕나무 열매 추출물 함량 조사 90
(7) 2014년 전남 함평 8월 채취 꾸지뽕나무 열매 Pilot 추출물 함량 조사 92
(8) 2014년 전남 함평 꾸지뽕나무 렬매 추출물 채취시기별 함량 조사 94
(9) 2015년 꾸지뽕나물 열매에 대한 채위, 지역별, 시기별 크기 및 무게 조사 35
(10) 2015년 꾸지뽕나무 여매 지역별, 시기별 추출물의 슈율조사97
(11) 꾸지뽕남 열매 추출물 지표성분 설정을 위한 분석법 개발 98
(12) 2015년 채취 지역별, 시기별 꾸지뽕나무 열매 추출물 성분함량 모니터링 99

4. 기억력 개선 및 인지능력 향상 생리활성 검정 111
가. 공시시료 및 시료조제 111
나. 기억력 관련 활성검정 방법 111
(1) Mtt assay를 이용한 뇌신경세포 보호 효과 111
(2) 산호-포도당 결핌(Oxygen Glucose Deprivation, OGD)을 이용한 뇌세포 보호효과 111
(3) Western blot 112
(4) Flow cytometry analysis 112
(5) Cell based proteasomje activity 112
(6) Cell free p[rotasome activity 113
(7) Ros generation assay 113
(8) Realtime PCR assay 113
(9) Transfection assay 113
(10) MCAO/R assay 113
(11) Ca2+ assay 114
(12) PRoteasome activity assay(with Luminometer)115
(13) JC-1 staining115
(14) Amyloid B 1-42(oligoneric form)형성 115
다 결과 및 고창

5. 동물행동 시럼 및 관련 활성 검정(1) 219
가. 재료 및 방법
나. 동룸행동시험에 따른 기능성 생리활성 검정 221
다. 결과 및 고찰
(1) 체중 변화 및 식이 효율 222
(2) 꾸지뽕나물 열매 50% 주정추출물이 단기 기억력에ㅣ 미치는 영향 223
(3) 꾸지뽕나무 열매 50% 주정추출물이 명시적 기억력에 미치는 영향 223
(4) 꾸지뽕나물 열매 50% 주정추출물이 공간 기억력에 미치는 영향 224
(5) 꾸지뽕나무 열매 50% 주정추출물이 형청 acetylcholine함량에 미치는 여향 225
(6) 꾸지뽕나무 열매 50% 주정추출물이 뇌조직의 acetylcholinesterase활성에 미치는 여향226
(7) 꾸지뽕나무 열매 50% 주정추출물이 choline acetyltransferase, p- tau, cleaved caspase-3 발현에 미치는 여향 226
6. 동물행동실험을 통한 인지·기억력 평가(II) 231
가. 재료 및 방법 231
나. Pc12를 이용한 꾸지뽕나무 열매 50% 주정추출물의 효능 평가 237
다. 뇌 조직 및 혈청을 이용한 인지, 기억력 항상에 대한 기전 분석 239
라. 결과 및 고찰
(1) 실험동물의 몸무게 변화 240
(2)꾸지뽕나무 열매 50% 주정추출물이 동물 활동성 및 정서적 안정성에 미치는 영향 241
(3)꾸지뽕나무 열매 50% 주정추출물이 인지, 기억력에 미치는 영향243
(4)꾸지뽕나무 열매 50% 주정추출물이 공간에 대한 학습기억에 미치는 영향 246
(5)꾸지뽕나무 열매 50% 주정추출물이 공포에 대한 학습기억에 미치는 영향 251
(6) PC12에서 꾸지뽕나무 열매 50% 주정추출물 및 scopolamine의 최적 실험농도 선정 253
(7) PC12에서의 꾸지뽕나무 열매 50% 주정추출물 처리에 따른 acetylcholinesterase의 활성 평가 254
(8) PC12에서의 꾸지뽕나무 열매 추출물이 인지, 기억 관련 기전(Pathway)분석 255
(9)꾸지뽕나물 열매 50% 주정추출물이 AMPK, CREB, mTOR, SIRT3의 발현 및 활성에 미치는 여향 257
(10) Western blot을 통해 신경기능 관련 biomarker인 AMPK,CREB 및 m TOR의 호라성을 전체 단백질 발현량과 비교하여 정량 결과258
(11) 꾸지뽕나무 열매 50% 주정추출물의 인지, 기억력 향상에 대한 유전체 영향 분석 260